iRGD靶向声学脂质体在类风湿关节炎诊疗中的作用

目的 制备集治疗与成像为一体的载甲氨喋呤(MTX)和吲哚菁绿(ICG)iRGD靶向载药声学脂质体(iRGD-MTX-ICG-ELIP),观察其靶向性及联合低频超声体外抑制滑膜细胞(MH7A)增殖的效果.方法 采用薄膜水化法和冷冻冻干法制备iRGD-MTX-ICG-ELIP,检测其一般特性及声学响应性,通过细胞摄取实验验证iRGD-MTX-ICG-ELIP的体外靶向结合性能,构建类风湿关节炎小鼠模型,通过靶组织的药物荧光强度验证iRGD-MTX-ICG-ELIP的体内靶向性;CCK8法检测iRGD-MTX-ICG-ELIP联合超声体外抑制MH7A增殖的效果.结果 制备的iRGD-MTX-ICG-ELIP粒径为134.4±17.6 nm,电位为-10.07± 4.28 mv,iRGD-MTX-ICG-ELIP中MTX和ICG的包封率分别为(62.56±0.77)%和(95.13±0.82)%;其联合低频超声控释药物发现,随超声作用强度增加和作用时间的延长,MTX与ICG释放均增多.细胞摄取实验表明血管内皮细胞HUVECs对iRGD-MTX-ICG-ELIP的摄取效率比对MTX-ICG-ELIP摄取效率高1.89倍,差异有统计学意义(P<0.05),活体成像实验显示iRGD-MTX-ICG-ELIP在RA发病关节的荧光强度明显强于非靶向组;CCK8检测结果显示,iRGD-MTX-ICG-ELIP联合超声组的MH7A存活率为(32.49±3.04)%,与未联合超声组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 本研究制备的iRGD-MTX-ICG-ELIP粒径小、均一性好,对HUVECs和RA病变关节组织具有较好的靶向性.较佳的药物包封率和声学响应性增强了iRGD-MTX-ICG-ELIP联合超声抑制MH7A的增殖作用,为后续更精准有效的治疗类风湿关节炎提供前期基础.     

核外p53通过AMPK/mTOR信号抑制自噬并促进热打击诱导的血管内皮细胞损伤

目的 阐明核外p53通过调控蛋白激酶（AMPK）/雷帕霉素靶体（mTOR）信号通路介导自噬抑制在热打击后血管内皮细胞（VECs）损伤的分子机制。方法 实验分为：对照组、热打击组、热打击组+Compound C组、热打击组+rapamycin组、热打击组+PFT组,并分别使用AMPK抑制剂Compound C、mTOR抑制剂（自噬激活剂）rapamycin、p53线粒体转位抑制剂PFT预处理细胞或C57BL/6小鼠,通过CCK8法检测细胞活力,Western blot观察p53线粒体移位、自噬关键蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1和P62以及AMPK/mTOR信号通路的激活情况,HE染色观察各组小鼠主动内皮血管病理改变,TUNEL染色观察各组小鼠动内皮血管凋亡情况。结果 与对照组相比,热打击后主动脉内皮细胞（MAECs）活力显著下降（P<0.05）,热打击后小鼠主动脉血管内皮细胞肿胀、脱落,内弹力膜断裂,平滑肌排列紊乱,可见大量凋亡细胞;热打击后随着复温时间（0、3、6、9 h）延长,MAECs胞浆中p53表达逐渐减弱,而线粒体p53表达逐渐增强;热打击后（6 h）LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达被抑制,p62蛋白表达增加（P<0.05）;热打击后（6 h）AMPK的磷酸化被抑制,mTOR、4EBP1和p70S6K的磷酸化表达增加（P<0.05）。AMPK抑制剂Compound C明显抑制了热打击后MAECs中LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达,促进了p62蛋白表达,并加重了热打击后小鼠主动脉血管的损伤以及促进了凋亡的增加,而mTOR抑制剂rapamycin均呈现相反作用。p53线粒体转位抑制剂PFT促进了AMPK的磷酸化激活,并抑制mTOR、4EBP1和p70S6K的磷酸化（P<0.05）;使用PFT后促进了LC3-Ⅱ和Beclin-1的表达,抑制了P62的表达（P<0.05）;使 用PFT后明显提高了MAECs的细胞活力（P<0.05）,也减轻了热打击后小鼠主动脉血管的损伤和凋亡的发生。结论 核外p53主要通过抑制AMPK活性,激活mTOR信号,继而介导细胞自噬抑制,参与热打击诱导的MAECs损伤。     

带旋髂深血管髂骨瓣和股方肌骨瓣移植治疗青壮年GardenⅢ-Ⅳ型股骨颈骨折的比较

目的:对比髋关节前侧S-P入路联合带旋髂深血管髂骨瓣植骨及后侧K-L入路联合带股方肌骨瓣植骨治疗青壮年股骨颈GardenⅢ/Ⅳ型骨折的疗效差异.方法:2004年1月至2011年1月收治46 例青壮年GardenⅢ/Ⅳ型股骨颈骨折患者,其中20例采用前侧S-P入路联合带旋髂深血管髂骨瓣植骨(S-P组),男12例,女8例,年龄(32.1±7.3)岁,骨折GardenⅢ型12例,Ⅳ型8例;26例采用髋关节后侧K-L入路联合应用带股方肌骨瓣植骨(K-L组),男20例,女6例,年龄(37.8±6.9)岁,GardenⅢ型16例,Ⅳ型10例.观察比较两组患者住院观察指标(住院时间、住院总费用、手术时间、术中出血量、术后并发症)、手术质量指标(骨折复位质量、内固定置入质量、骨折愈合时间、骨折不愈合、股骨头缺血性坏死)以及髋关节功能Harris评分.结果:46例患者术后获得随访,时间28~41个月,平均32个月.患者术中出血量:S-P组为(92.3±10.4) ml,K-L组为(132.4±11.2) ml,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);手术时间:S-P组为(81.4±9.2) min,K-L组为(67.1±4.5) min,两组比较差异有统计学意义(P<0.05).术后S-P组有1例患者出现内科并发症,而K-L组有9例;在骨折愈合时间上,S-P组(83.5±7.3) d,K-L组(103.2±12.6) d,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);术后30个月两组Harris 评分差异有统计学意义(P<0.05).结论:采用髋关节前侧S-P入路治疗青壮年Ⅲ/Ⅳ股骨颈骨折,具有解剖清晰、操作便利的特点,与后侧K-L入路相比较,该入路能较好的保留股骨颈残留血供,联合带旋髂深血管髂骨瓣植骨能较好重建股骨颈血供,利于骨折愈合.     

超高频术中探头评价健康中青年人群的手腕关节滑膜厚度

目的探讨超高频术中探头检查健康中青年人群双侧腕关节、掌指关节及近端指间关节的滑膜,获取手腕关节滑膜特点及 正常参考值范围。方法选择100例健康中青年志愿者,其中男性50例（18~54岁,年龄36.2±5.0岁）、女性50例（20~56岁,年龄 38.8±5.5岁）,采用GE Logiq S8 18M马球棍形线阵探头观察双侧腕关节、掌指关节及近端指间关节并采用直接法测量滑膜厚 度。结果研究对象双手间比较,腕关节、掌指关节及近端指间关节滑膜厚度差异无统计学意义（P>0.05）。研究对象伸面及屈 面间比较,腕关节、掌指关节及近端指间关节滑膜厚度差异无统计学意义（P>0.05）。<40岁组与≥40岁组比较,腕关节、掌指关 节及近端指间关节滑膜厚度差异无统计学意义（P>0.05）。男性与女性间比较,腕关节0.79±0.07 mm vs 0.65±0.08 mm、掌指关节 0.59±0.06 mm vs 0.52±0.07 mm及近端指间关节0.51±0.05 mm vs 0.46±0.06 mm间滑膜厚度差异有统计学意义（P<0.05）;腕关 节、掌指关节及近端指间关节间比较,其滑膜厚度差异有统计学意义（P<0.05）。结论采用高分辨率的高频探头直接法测量的 健康中青年人群腕关节、掌指关节及近端指间关节滑膜厚度特点及正常参考值范围,对类风湿关节炎等疾病早期诊断及治疗具 有一定的指导意义。